Produkter

Mekanistiska insikter i en Ca2+-beroende familj av alfa-mannosidaser i en mänsklig tarmsymbiont.

Kolonbakterier, exemplifierade av Bacteroides thetaiotaomicron, spelar en nyckelroll för att upprätthålla människors hälsa genom att utnyttja stora familjer av glykosidhydrolaser (GHs) för att utnyttja dietpolysackarider och värdglykaner som näringsämnen.Sådan expansion av GH-familjen exemplifieras av 23-familjen GH92-glykosidaser som kodas av B. thetaiotaomicron-genomet.Här visar vi att dessa är alfa-mannosidaser som verkar via en enda förskjutningsmekanism för att utnyttja värd-N-glykaner.Den tredimensionella strukturen av två GH92 mannosidaser definierar en familj av tvådomänproteiner där det katalytiska centret är beläget vid domängränsytan, vilket ger syra (glutamat) och bas (aspartat) assistans till hydrolys i en Ca(2+)- beroende sätt.De tredimensionella strukturerna hos GH92s i komplex med inhibitorer ger insikt i specificiteten, mekanismen och konformationsvägen för katalys.Ca(2+) spelar en nyckelkatalytisk roll för att hjälpa till att förvränga mannosidan bort från dess grundtillstånd (4)C(1) stolkonformation mot övergångstillståndet.（Bibliografi: Nat.Chem.Biol.6, 125-32, (2010）

Frontal affinitetskromatografi av ovalbuminglykoasparaginer på en concanavalin A-Sepharose-kolonn.En kvantitativ studie av bindningsspecificiteten hos lektinet.

Interaktionerna mellan Sepharose 4B-immobiliserat concanavalin A (ConA) med 10 glykosparaginer härledda från ovalbumin undersöktes kvantitativt genom frontal affinitetskromatografi.I denna metod appliceras en kolhydratlösning kontinuerligt på en ConA-Sepharose-kolonn och retardationen av elueringsfronten mäts som en parameter för styrkan av interaktionen.Dissociationskonstanten (Kd) för varje sackarid med ConA kan bestämmas.En analys av bindningen av p-nitrofenyl-alfa,D-mannosid har visat att bindningsegenskaperna för ConA inte förändras väsentligt efter immobilisering på Sepharose 4B.Var och en av ovalbuminglykosparaginerna märktes med tritium genom den reduktiva metyleringsmetoden för analys.En jämförelse av de erhållna Kd-värdena visade att bindningen av ConA varierar avsevärt med mycket små strukturella skillnader i glykosylkedjan.Resultaten tyder på att ConA känner igen en specifik glykosylkedjestruktur, Man alfa 1-6(Man alfa 1-3)Man, i vilken minst en hydroxylgrupp vid C-3-positionen av C-6-kopplad mannos bör vara fri.