Produkter

Oxidativ skada på DNA-baser resulterar vanligtvis i bildandet av oxiderade puriner, särskilt 7,8-dihydro-8-oxoguanin (8-oxoG) och 7,8-dihydro-8-oxoadenin (8-oxoA), varvid den förra är en brunn. känd mutagen lesion.Eftersom 8-oxoG lätt utsätts för ytterligare oxidation jämfört med normala baser, undersöktes insättningen av en bas under DNA-syntes mittemot en oxiderad form av 8-oxoG in vitro.En syntetisk mall innehållande en enda 8-oxoG-skada behandlades först med olika enelektronoxidanter eller under singletsyrebetingelser och utsattes sedan för primerförlängning katalyserad av Klenow-fragment exo- (Kf exo-), kalvtymus DNA-polymeras alfa (pol alfa) ) eller humant DNA-polymeras beta (pol beta).I enlighet med tidigare rapporter infogas dAMP och dCMP selektivt mittemot 8-oxoG med alla tre DNA-polymeraserna.Intressant nog visade sig oxidation av 8-oxoG inducera dAMP- och dGMP-insättning mittemot lesionen av Kf exo- med övergående hämning av primerförlängning på platsen för den modifierade basen.Dessutom utgör lesionen ett block under DNA-syntes av pol alfa och pol beta.Experiment med en 8-oxoA-modifierad templatoligonukleotid visar att både 8-oxoA och en oxiderad form av 8-oxoA direkt infogning av dTMP genom Kf exo-.Masspektrometrisk analys av 8-oxoG-innehållande oligonukleotider före och efter oxidation med IrCl62-överensstämmer med oxidation av primärt 8-oxoG-stället, vilket resulterar i bildning av en guanidinohydantoindel som huvudprodukt.Inga bevis för bildandet av abasiska ställen erhölls.Dessa resultat visar att en oxiderad form av 8-oxoG, möjligen guanidinohydantoin, kan styra felläsning och felinsättning av dNTP under DNA-syntes.Om en sådan process inträffade in vivo skulle den representera en punktmutagen lesion som leder till G-->T- och G-->C-transversioner.Den motsvarande oxiderade formen av 8-oxoA visar emellertid i första hand korrekt insättning av T under DNA-syntes med Kf exo-.