Produkter

LecA (PA-IL) är ett cytotoxiskt lektin och adhesin som produceras av Pseudomonas aeruginosa som binder hydrofoba galaktosider med hög specificitet och affinitet.Genom att använda en lecA-egfp translationsfusion och immunoblotanalys av den extracellulära biofilmmatrisen visar vi att lecA uttrycks i biofilmodlade celler.I statiska biofilmanalyser på både polystyren och rostfritt stål reducerades biofilmsdjupet och yttäckningen genom mutation av lecA och förstärktes i den LecA-överproducerande stammen PAO-P47.Biofilmyttäckning av moderstammen PAO-P47 men inte lecA-mutanten på stålkuponger hämmades också av tillväxt i närvaro av antingen isopropyl-beta-D-tiogalaktosid (IPTG) eller p-nitrofenyl-alfa-D-galaktosid ( NPG).Dessutom kan mogna vildtypsbiofilmer bildade i frånvaro av dessa hydrofoba galaktosider dispergeras genom tillsats av IPTG.Däremot hade tillsats av p-nitrofenyl-alfa-L-fukos (NPF) som har hög affinitet för P. aeruginosa LecB (PA-IIL)-lektin ingen effekt på biofilmbildning eller spridning.Planktonisk tillväxt av P. aeruginosa PAO1 var opåverkad av närvaron av IPTG, NPG eller NPF, inte heller kunde stammen använda dessa sockerarter som kolkällor, vilket tyder på att de observerade effekterna på biofilmbildning berodde på den kompetitiva hämningen av LecA-ligand bindande.Liknande resultat erhölls också för biofilmer odlade under dynamiska flödesförhållanden på stålkuponger, vilket tyder på att LecA bidrar till P. aeruginosa biofilmarkitektur under olika miljöförhållanden.

Ett alfa-L-fukosidas (EC 3.2.1.51) som kan frigöra t-fukosylresten från sidokedjan av xyloglukanoligosackarider har detekterats i bladen på Arabidopsis-växter.Dessutom renades ett alfa-L-fucosidas med liknande substratspecificitet från kålblad (Brassica oleracea) för att ge ett enda band på SDS-PAGE.Två peptidsekvenser erhölls från detta proteinband, och de användes för att identifiera en Arabidopsis-gen som kodar för ett alfa-fucosidas som vi föreslår att kalla AtFXG1.Dessutom har en Arabidopsis-gen med homologi med kända alfa-L-fucosidaser också hittats, och vi föreslog att den skulle döpas till AtFUC1.Både AtFXG1 och ATFUC1 uttrycktes heterologt i Pichia pastoris-celler och alfa-L-fucosidasaktiviteterna utsöndrades till odlingsmediet.Alfa-L-fukosidaset som kodas av AtFXG1 var aktivt mot oligosackariderna från xyloglukan XXFG såväl som mot 2'-fukosyllaktitol men inte mot p-nitrofenyl-alfa-L-fukopyranosid.Den heterologt uttryckta AtFUC1 var emellertid endast aktiv mot 2'-fukosyl-laktitol.Det förra måste alltså vara relaterat till xyloglukanmetabolism.