Produkter

X-gal (även förkortat BCIG för 5-bromo-4-klor-3-indolyl-β-D-galaktopyranosid) är en organisk förening som består av galaktos kopplad till en substituerad indol.Föreningen syntetiserades av Jerome Horwitz och medarbetare 1964. Det formella kemiska namnet förkortas ofta till mindre exakta men också mindre besvärliga fraser som bromklorindoxylgalaktosid.X från indoxyl kan vara källan till X i X-gal-kontraktionen.X-gal används ofta inom molekylärbiologi för att testa förekomsten av ett enzym, β-galaktosidas, i stället för dess vanliga mål, en β-galaktosid.Det används också för att detektera aktiviteten hos detta enzym inom histokemi och bakteriologi.X-gal är en av många indoxylglykosider och estrar som ger olösliga blå föreningar som liknar indigofärgämne som ett resultat av enzymkatalyserad hydrolys.

X-gal är en analog av laktos och kan därför hydrolyseras av enzymet β-galaktosidas som klyver β-glykosidbindningen i D-laktos.X-gal, när den klyvs av β-galaktosidas, ger galaktos och 5-brom-4-klor-3-hydroxiindol - 1. Den senare dimeriserar sedan spontant och oxideras till 5,5'-dibrom-4,4'-diklor -indigo - 2, en intensivt blå produkt som är olöslig.X-gal i sig är färglös, så närvaron av blåfärgad produkt kan därför användas som ett test för närvaron av aktivt β-galaktosidas.Detta gör det också möjligt för bakteriellt β-galaktosidas (så kallat lacZ) att användas som reporter i olika tillämpningar.

I tvåhybridanalys kan p-galaktosidas användas som reporter för att identifiera proteiner som interagerar med varandra.I denna metod kan genombibliotek screenas för proteininteraktion med användning av jäst eller bakteriesystem.När det finns en framgångsrik interaktion mellan proteiner som screenas, kommer det att resultera i bindningen av en aktiveringsdomän till en promotor.Om promotorn är kopplad till en lacZ-gen, kommer produktionen av β-galaktosidas, vilket resulterar i bildandet av blåpigmenterade kolonier i närvaro av X-gal, därför att indikera en framgångsrik interaktion mellan proteiner.Denna teknik kan vara begränsad till screening av bibliotek med storlek mindre än cirka 106. Den framgångsrika klyvningen av X-gal skapar också en märkbart illaluktande lukt på grund av förflyktigandet av indol.

Eftersom X-gal själv är färglös, kan närvaron av blåfärgad produkt användas som ett test för närvaron av ett aktivt β-galaktosidas.

Denna enkla identifiering av ett aktivt enzym gör att genen för βgalaktosidas (lacZ-genen) kan användas som en reportergen i olika tillämpningar.