Produkter

Serin/treoninproteinfosfataser har beskrivits i många patogena bakterier som essentiella enzymer involverade i fosforyleringsberoende signaltransduktionsvägar och ofta associerade med virulensen hos dessa organismer.En inspektion av Mycoplasma synoviae-genomet avslöjade närvaron av en gen (prpC) som kodar för ett förmodat proteinfosfatas från underfamiljen proteinfosfatas 2C (PP2C).Här rapporterar vi en fullständig biokemisk karakterisering av M. synoviae fosfatas (PrpC) och metalljonernas särskilda roll i struktur-funktionsförhållandet för detta enzym.PrpC-aminosyrasekvensanalys avslöjade att alla rester involverade i det dinukleära metallcentret och de förmodade tredje metalljon-koordinerande resterna, konserverade i PP2C-fosfataser, är närvarande i PrpC.PrpC är ett monomert protein som kan defosforylera fosfosubstrat med Mn(2+)-joners beroende.Termisk stabilitetsanalys visade enzymstabiliteten vid milda temperaturer och inverkan av Mn(2+)-joner i denna egenskap.Masspektrometrianalys antydde att tre metalljoner binder till PrpC, varav två med en skenbar högaffinitetskonstant.Mutationsanalys av de förmodade tredje metallkoordinerande resterna, Asp122 och Arg164, visade att dessa varianter uppvisade en svagare bindning av manganjoner och att båda mutationerna påverkade PrpC-fosfatasaktivitet.Enligt dessa resultat är PrpC en metallberoende proteinfosfatasmedlem med en förbättrad stabilitet i holoformen och med Asp122, möjligen inblandad i det tredje metallbindningsstället, väsentligt för katalytisk aktivitet.