Produkter

Proteinfosforylering reglerar olika cellulära funktioner och spelar en nyckelroll i den tidiga utvecklingen av växter.För att komplettera och utöka tidigare undersökningar av proteinfosforylering i Arabidopsis plantor använde vi en alternativ metod som kombinerar proteinextraktion under icke-denaturerande förhållanden med immobiliserad metalljonaffinitetskromatografi (IMAC) anrikning av intakta fosfoproteiner i Rubisco-utarmade extrakt, följt av identifiering med användning av tvådimensionell gelelektrofores (2-DE) och vätskekromatografi-tandem masspektrometri (LC-MS/MS).In-gel trypsindigestion och analys av utvalda gelfläckar identifierade 144 fosforylerade peptider och rester, av vilka endast 18 fosfopeptider och 8 fosfositer hittades i PhosPhAt 4.0 och P3DB Arabidopsis thaliana fosforyleringsställes databaser.Mer än hälften av de 82 identifierade fosfoproteinerna var involverade i kolhydratmetabolism, fotosyntes/andning eller oxidativ stressresponsmekanik sms.Anrikning av intakta fosfoproteiner före 2-DE och LC-MS/MS verkar förbättra detektionen av fosforylerade treonin- och tyrosinrester jämfört med metoder som använder anrikning på peptidnivå, vilket tyder på att de två tillvägagångssätten är något komplementära när det gäller täckning av fosforyleringsställen.Genom att jämföra resultat för unga plantor med de som tidigare erhållits för mogna Arabidopsis-blad identifierade fem proteiner som är differentiellt fosforylerade i dessa vävnader, vilket visar potentialen hos denna teknik för att undersöka dynamiken i proteinfosforylering under växtutveckling.