Produkter

Eukaryota celler innehåller en delikat balans av små mängder av de fyra deoxiribonukleosidtrifosfaterna (dNTP), tillräckligt för bara några minuters DNA-replikation.Både en brist och ett överskott av en enda dNTP kan resultera i ökade mutationshastigheter, felaktig DNA-reparation eller mitokondriell DNA-utarmning.dNTP kvantifieras vanligtvis genom en enzymatisk analys där inkorporering av radioaktivt dATP (eller radioaktivt dTTP i analysen för dATP) i specifika syntetiska oligonukleotider av ett DNA-polymeras är proportionell mot koncentrationen av det okända dNTP.Vi finner att det vanligen använda Klenow DNA-polymeraset kan ersätta motsvarande ribonukleotid för den okända dNTP, vilket i vissa fall leder till en stor överskattning av dNTP.Vi beskriver nu analysförhållanden för varje dNTP som undviker ribonukleotidinkorporering.För dTTP- och dATP-analyserna är det tillräckligt att minimera koncentrationerna av Klenow-enzymet och av märkt dATP (eller dTTP);för dCTP och dGTP var vi tvungna att ersätta Klenow-enzymet med antingen Taq DNA-polymeras eller Thermo Sequenase.Vi föreslår att i vissa tidigare rapporter kan inkorporering av ribonukleotid ha orsakat för höga värden för dGTP och dCTP.