Produkter

Monogalaktopyranosider av fluorescein och fluoresceinmetylester: syntes, enzymatisk hydrolys genom biotnylerat β-galaktosidas och bestämning av translationell diffusionskoefficient

Fluoresceinmonoglykosider (d-galaktopyranosid (FMG) och d-glukopyranosid) och deras metylester (MFMG) har framställts från acetobromoglukos/galaktos och fluoresceinmetylester i goda utbyten.Enzymatiska hydrolysexperiment (med användning av biotinylerat β-galaktosidas) av galaktoderivaten har utförts och kinetiska parametrar beräknades.En 15–20 gångers ökning av fluorescensintensiteten har observerats under hydrolysen.En linjär ökning av fluorescens har noterats vid kort tid och låg koncentration av substrat, vilket gör dessa föreningar användbara och känsliga prober för galaktosidaser.Storleken på Michaelis-Menten-konstanten (Km)-värdet för MFMG är högre än för FMG, vilket tyder på en möjlig konformationsförändring av det fluorogena substratet.Km-värdet för biotinylerad β-Gal med FMG är lägre än för det nativa enzymet.Denna observation indikerar högre substrataffinitet för det biotinylerade enzymet i jämförelse med det nativa enzymet.Translationella diffusionskoefficienter har mätts, för både fluorogena substrat och båda produkterna, med användning av fluorescenskorrelationsspektroskopi.Translationella diffusionskoefficienter för fluorogena substrat och de enzymatiska hydrolysprodukterna har uppmätts vara likartade, i intervallet 3,5–4,5 × 10–10 m2 s−1.Sålunda är en förbättring eller fördröjning av den enzymatiska kinetiken på grund av skillnader i translationell rörlighet för substrat och produkt inte så uppenbar.