Produkter

En av faktorerna som förhindrar klinisk tillämpning av regenerativ medicin på degenerativa brosksjukdomar är en lämplig cellkälla.Kondrocyter, den enda celltypen av brosk, som odlas in vitro under odlingsbetingelser för att utöka cellantalet förlorar sin fenotyp tillsammans med förmågan att generera hyalin broskvävnad.I denna studie fastställer vi att ett serum- och tillväxtfaktorfritt tredimensionellt (3D) odlingssystem återställer förmågan hos de passerade kondrocyterna att bilda broskvävnad in vitro, en process som involverar sox9. Bovina artikulära kondrocyter passerades två gånger till möjliggör cellantalexpansion (P2) och odlas vid hög densitet på 3D-kollagen-typ-II-belagda membran i media med högt glukosinnehåll kompletterat med insulin och dexametason (SF3D).Cellerna karakteriserades efter monolagerexpansion och efter 3D-odling genom flödescytometri, genuttryck och histologi.De tidiga förändringarna i signaltransduktionsvägar under redifferentiering karakteriserades. P2-cellerna visade en progenitorliknande antigenprofil på 99 % CD44(+) och 40 % CD105(+) och en genuttrycksprofil som tyder på interzonceller.P2 i SF3D uttryckte kondrogena gener och ackumulerad extracellulär matris.Nedreglering av insulinreceptor (IR) med HNMPA-(AM3) eller PI-3/AKT-kinasvägen (aktiverad av insulinbehandling) med Wortmannin hämmade kollagensyntesen.HNMPA-(AM3) reducerade uttryck av Col2-, Col11- och IR-gener samt Sox6 och -9.Samimmunoprecipitations- och kromatinimmunoutfällningsanalyser av HNMPA-(AM3)-behandlade celler visade bindning av koaktivatorerna Sox6 och Med12 med Sox9 men minskad Sox9-Col2a1-bindning. Vi beskriver en ny odlingsmetod som möjliggör ökning av antalet kondrocyter och främjar hyalinliknande broskvävnadsbildning delvis genom insulinmedierad Sox9-Col2a1-bindning.Lämpligheten av vävnaden som genereras via detta tillvägagångssätt för användning vid ledreparation måste undersökas in vivo.