Produkter

I likhet med andra positiv-strängade RNA-virus replikeras tombusvirus av det membranbundna virala replikaskomplexet (VRC).VRC består av det p92-viruskodade RNA-beroende RNA-polymeraset (RdRp), den virala p33 RNA-chaperonen och flera adjungerade värdproteiner.För att bli en funktionell RdRp efter dess translation, bör p92-replikationsproteinet inkorporeras i VRC, följt av dess aktivering.Vi har tidigare visat i en cellfri jästextraktbaserad analys att aktiveringen av Tomato bushy stuntvirus (TBSV) RdRp kräver en eller flera lösliga värdfaktorer.I den här artikeln identifierar vi det cellulära värmechockproteinet 70 (Hsp70) som den adjungerade värdfaktorn som krävs för aktiveringen av en N-terminalt trunkerad rekombinant TBSV RdRp.Dessutom hämmar småmolekylbaserad blockering av Hsp70-funktionen RNA-syntes av tombusviruset RdRp in vitro.Dessutom visar vi att neutrala fosfolipider, nämligen fosfatidyletanolamin (PE) och fosfatidylkolin (PC), förbättrar RdRp-aktivering in vitro.Däremot visar fosfatidylglycerol (PG) en stark och dominant hämmande effekt på in vitro RdRp-aktivering.Vi visar också att PE och PC stimulerar RdRp-viral plus-sträng RNA [(+)RNA] interaktion, medan PG hämmar bindningen av det virala RNA till RdRp.Baserat på de stimulerande kontra hämmande rollerna för olika fosfolipider i tombusvirus RdRp-aktivering, föreslår vi att lipidsammansättningen av riktade subcellulära membran kan användas av tombusvirus för att reglera ny VRC-sammansättning under infektionsförloppet. Det viruskodade RNA-beroende RNA-polymeraset (RdRp), som är ansvarig för att syntetisera den virala RNA-avkomman i infekterade celler av flera positivsträngade RNA-virus, är initialt inaktiv.Denna strategi kommer sannolikt att undvika viral RNA-syntes i cytosolen som snabbt skulle leda till induktion av RNA-utlösta cellulära antivirala svar.Under sammansättningen av det membranbundna replikaskomplexet, aktiveras det virala RdRp genom en ofullständigt förstådd process som gör RdRp kapabel till RNA-syntes.Genom att använda TBSV RdRp visar vi att den adjungerade cellulära Hsp70-chaperonen och neutrala fosfolipider underlättar RdRp-aktivering in vitro.Däremot har fosfatidylglycerol (PG) en dominant hämmande effekt på in vitro RdRp-aktivering och RdRp-viral RNA-interaktion, vilket tyder på att den membranösa mikrodomänen som omger RdRp i hög grad påverkar dess förmåga till RNA-syntes.Sålunda beror aktiveringen av det virala RdRp sannolikt på flera värdkomponenter i infekterade celler.