Produkter

Nukleär ackumulering av en mutant form av kärnproteinet Lamin-A, kallad Progerin (PG) eller Lamin AΔ50, sker vid Hutchinson-Gilford Progeria Syndrome (HGPS) eller Progeria, en sjukdom som accelererar åldrande.Ett av huvudsymtomen på denna genetiska störning är en förlust av subkutant fett på grund av en dramatisk lipodystrofi. Vi inducerade stabilt uttrycket av humant PG och GFP -Green Fluorescent Protein- som kontroll i 3T3L1-celler med hjälp av ett lentiviralt system för att studera effekt av PG-uttryck i differentieringskapaciteten hos denna cellinje, en av de mest använda adipogena modellerna.Kvantitativ proteomik (iTRAQ) gjordes för att studera effekten av PG-ackumuleringen.Flera av de modulerade proteinerna validerades genom immunoblotting och realtids-PCR.Mitokondriell funktion analyserades genom mätning av a) den mitokondriella basala aktiviteten, b) superoxidanjonproduktionen och c) den individuella effektiviteten hos de olika komplexen i andningskedjan. Vi fann att överuttryck av PG genom lentiviral genleverans leder till en minskning i proliferationshastigheten och till defekter i adipogen kapacitet jämfört med kontrollen.Kvantitativ proteomikanalys visade 181 proteiner signifikant (p<0,05) modulerade i PG-uttryckande preadipocyter.Mitokondriell funktion är nedsatt i PG-uttryckande celler.Specifikt har vi upptäckt en ökning av aktiviteten hos komplex I och en överproduktion av Superoxidanjon.Inkubation med reaktiva syrearter (ROS)-rensare leder till en minskning av autofagisk proteolys, vilket avslöjas av LC3-II/LC3-I-förhållandet. PG-uttryck i 3T3L1-celler främjar förändringar i flera biologiska processer, inklusive cytoskelettets struktur, lipidmetabolism, kalcium reglering, translation, proteinveckning och energigenerering av mitokondrierna.Våra data stärker bidraget från ROS-ackumulering till fenotypen för för tidigt åldrande och etablerar en koppling mellan mitokondriell dysfunktion och förlust av proteostas i HGPS.