Produkter

ORF45-proteinet från Kaposis sarkom-associerade herpesvirus (KSHV) är ett gammaherpesvirus-specifikt omedelbart-tidigt tegumentprotein.Våra tidigare studier har avslöjat dess avgörande roller i både tidiga och sena stadier av KSHV-infektion.I denna studie undersökte vi interaktomen av ORF45 med hjälp av en panel av monoklonala antikroppar.Förutom de tidigare identifierade extracellulära reglerade kinas- (ERK)- och p90-ribosomala S6-kinas- (RSK)-proteinerna, hittade vi flera andra samrenade proteiner, inklusive framträdande sådana på ~38 kDa och ~130 kDa.Masspektrometri avslöjade att 38-kDa-proteinet är viralt ORF33 och 130-kDa-proteinet är cellulärt USP7 (ubiquitin-specifikt proteas 7).Vi kartlade den ORF33-bindande domänen till de mycket konserverade karboxylterminala 19 aminosyrorna (aa) av ORF45 och den USP7-bindande domänen till det rapporterade konsensusmotivet i den centrala regionen av ORF45.Med användning av immunfluorescensfärgning observerade vi kolokalisering av ORF45 med ORF33 eller USP7 både under transfekterade förhållanden och i KSHV-infekterade celler.Dessutom märkte vi ORF45-beroende omlokalisering av en del av ORF33/USP7 från kärnan till cytoplasman.Vi fann att ORF45 orsakade en ökning av ORF33-proteinackumulering som avskaffades om antingen den ORF33- eller USP7-bindande domänen i ORF45 raderades.Vidare reducerade deletion av den konserverade karboxylterminalen av ORF45 i KSHV-genomet drastiskt nivån av ORF33-protein i KSHV-infekterade celler och avskaffade produktionen av avkommavirioner.Sammantaget avslöjar våra resultat inte bara nya komponenter i ORF45-interaktomen, utan visar också att interaktionerna mellan dessa proteiner är avgörande för KSHV-lytisk replikation. Kaposis sarkomassocierade herpesvirus (KSHV) är orsaken till flera humana cancerformer.KSHV ORF45 är ett multifunktionellt protein som krävs för KSHV lytisk replikation, men de exakta mekanismerna genom vilka ORF45 utför sina kritiska funktioner är oklara.Våra tidigare studier avslöjade att allt ORF45-protein i celler finns i komplex med hög molekylvikt.Vi försökte därför karakterisera interaktomen hos ORF45 för att ge insikter i dess roller under lytisk replikering.Med hjälp av en panel av monoklonala antikroppar undersökte vi ORF45-interaktomen i KSHV-infekterade celler.Vi identifierade två nya bindningspartners för ORF45: det virala proteinet ORF33 och cellulärt ubiquitin-specifikt proteas 7 (USP7).Vi visar vidare att interaktionen mellan ORF45 och ORF33 är avgörande för effektiv produktion av KSHV-viruspartiklar, vilket tyder på att den riktade interferensen med denna interaktion kan representera en ny strategi för att hämma KSHV-lytisk replikation.