Produkter

Differentiering av orbitala fibroblaster till mogna adipocyter och efterföljande ackumulering av fettvävnad har visats i utvecklingen av Graves orbitopati (GO).Autofagi är involverat i adipogenes, men lite är känt om autofagins roll i initieringen och progressionen av GO.Syftet med denna studie är att undersöka rollen av autofagi i patogenesen av GO. Orbitala fett-/bindvävsexplantat från patienter med GO och från normala försökspersoner, såväl som isolerade orbitala fibroblaster, analyserades.Adipogenes inducerades med användning av differentierande medium med eller utan väteperoxid, och autofagi manipulerades med hjälp av bafilomycin A1 och Atg5-riktat kort hårnåls-RNA (shRNA).Autofagosomer identifierades med elektronmikroskopi.Uttryck av autofagi-relaterade gener och adipogenes-relaterade transkriptionsfaktorer analyserades genom realtid omvänd transkription-polymeraskedjereaktion och/eller Western blot-analys.Lipiddroppsackumulering undersöktes med Oil Red O-färgning. Autofagiska vakuoler var rikligare i GO-celler än i icke-GO-celler (p<0,05).Uttryck av autofagi-relaterade gener var signifikant högre i GO-vävnader och celler än i deras icke-GO-motsvarigheter.Interleukin-1β ökade proteinet LC3-II, p62 och Atg7 i GO-celler.Autofagosomackumulering visades på dag 4 av adipogenes och minskade vid dag 10, tillsammans med lipiddropparbildning.Uttrycket av LC3- och p62-proteiner ökade inom 48 timmar efter differentiering och minskade gradvis från dag 4 till 10. Bafilomycin A1-behandling och Atg5-nedbrytning av shRNA hämmade lipiddroppsackumulering och undertryckte uttryck av adipogena markörer. Autofagi ökade i GO-vävnad och celler jämfört med icke-GO vävnad och celler, vilket tyder på att autofagi spelar en roll i GO patogenes.Autofagimanipulation kan vara ett terapeutiskt mål för GO.